真菌毒素黄曲霉素荧光定量检测步骤_天津龙科新域生物技术有限公司

真菌毒素黄曲霉素荧光定量检测步骤

2022-05-13 浏览次数：303次

黄曲霉素检测所需仪器

天平、离心机、涡旋振荡器、恒温孵育器、荧光读数仪、微量移液器、两毫升离心管、黄曲霉毒素荧光定量检测卡、配套的移液器洗头、试管架、量筒等

黄曲霉毒素提取液配置

用量筒量取无水乙醇和蒸馏水按照1:1的体积比进行配置。
首先用250ml毫升量筒量取200ml无水乙醇导入配置50%乙醇水的瓶子里
在量取200ml毫升蒸馏水倒入50%乙醇水容器中，摇匀即可。
注：单独量取无水乙醇和蒸馏水，不能定容的方式来配置。

黄曲霉毒素试剂盒组成

说明书及IC卡、稀释液和5桶黄曲霉菌毒素荧光定量检测试纸条

黄曲霉毒素检测前准备

样本前处理，取≥1千克代表性样本，进行粉碎过20目筛混合均匀
孵育器需要提前10-15分钟开机预热。

黄曲霉毒素样本提取

称取粉碎好的样品5g倒入50ml离心管中
注意：称量允许误差是±1%，即4.95-5.05g之间。
用50ml量筒量取40ml50%乙醇水到50ml离心管中。
3000转/分涡旋振荡器震荡提取5分钟
注：要求混匀充分，否则提取效率低，可能造成检测结果不准确
样品量比较多的话，可以手摇颠倒混匀10分钟来提取。或者220转/分钟摇床上震荡提取10分钟。
提取完后室温静置3分钟。

黄曲霉毒素样本稀释

静置过程中可以提前把2ml离心管做好标记准备好。
把1000ul移液器调整到450ul，移取450ul稀释液到2ml离心管中。
然后把200ul移液器调至50ul。
移取50ul静置好的上清液到2ml离心管中
盖好盖子涡旋震荡或手摇10秒。
将混匀后的离心管对称的放入离心机中，4000转离心5分钟或7000转离心1分钟即可。
离心完把离心管取出放到试管架上待用。

黄曲霉毒素样本的孵育及反应

把卡托从孵育器中取出，把所需检测的卡条装入，装卡条时注意对应通道位置，如图所示，通道1是黄曲霉。通道2是呕吐毒素，通道3是玉米赤霉烯酮。装好后把卡托放入到孵育器卡槽内，把孵育器上盖翻开，把对应项目的微孔放入到底托，调移液器到200ul，用200ul移液器把离心后的上清液加入微孔中，加完液体盖上黑色盖子孵育5分钟，把排枪调到100ul待用，计时结束后把移液器装好吸头放入到微孔中反复吹打混匀30-40次。（注：吹打时需参照视频所示操作，避免产生大量气泡）吹打混匀完后盖上黑色盖子孵育3分钟，3分钟后把孵育器合实，孵育5分钟（精确计时），

黄曲霉毒素样本读数

打开读数仪左侧电源键直到仪器弹出登陆界面，初始账号及密码：admin用触控笔录入登陆界面，把试剂盒里面的IC卡取出来分别扫描录入到仪器中，（注：IC卡上的批号必须和所用试剂盒的批号一致，不同批次的不能混用）。IC卡扫描完毕后点击*二个图标进行读数界面设置，把读数界面左下角的通道1-3对应卡条选择好项目，A/B选项的位置全部选择B。五分钟计时结束后把所有反应中的卡托全部取出，放入到仪器右下角的仓内，放置好后点读值即可，（注：有颜色的部分朝上，卡托放入位置如视频所示要在1分钟之内读数，**过1分钟检测结果无效），该界面为读数完毕后的数据呈现可在此处打印数据，此为打印出来的数据展示
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